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酶联免疫试验预备之*洗刷方法

更新时间:2017-08-15 点击量:815

酶联免疫试验预备之*洗刷方法

ELISA试剂盒剖析洗刷的方法除某些 ELISA 仪器配有特别的自动洗刷仪外,手工操作有浸泡式和流水冲刷式两种,进程如下:
(1)浸泡式
a.吸干或甩干孔内反响液;
b.用洗刷液过洗一遍(将洗刷液注满板孔后,即甩去);
c.浸泡,行将洗刷液注满板孔,放置1-2 分钟,间歇摇摆,浸泡时刻不行随意缩短;
d.吸干孔内液体。吸干应*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液体后在清洗毛巾或吸水纸上拍干;
e.重复操作c 和d,洗刷3-4次(或按阐明规则)。在间接法中如本底较高,可增加洗刷次数或延伸浸泡时刻。微量滴定板多选用浸泡式洗刷法。洗刷液多为含非离子型洗刷剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的是疏水性的,非离子型洗刷剂既含疏水基团,ELISA试剂盒也含亲水基团,其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键,然后削弱蛋白质与固相载体的,并借助于亲水基团和水分子的作用,使蛋白质回复到水溶液状况,然后脱离固相载体。洗刷液中的非离子型洗刷剂一般是吐温 20,其浓度可在0.05%-0.2%
之间,高于0.2%时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
zui初用于小珠载体的洗刷,洗刷液仅为蒸馏水乃至可用自来水。洗刷时附接一特别设备,使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗,持续冲刷 2 分钟后,吸干液体,再用蒸馏水浸泡2 分钟,吸干即可。浸泡式犹如盆浴,流水冲刷式则好比淋浴,其洗刷作用更为*,且也简洁、快速。
已有试验标明,流水冲刷式相同也适用于微量滴定板的洗刷。洗刷时设法加大水流量或加大水压,让水流冲击板孔外表,洗刷作用更佳。