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ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置

更新时间:2017-08-04 点击量:878

ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置

ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础,ELISA试剂以及各种溶液如何配置?zui近刚做了下ELISA实验,把各种ELISA配置方法汇总如下:
1、ELISA实验包被缓冲液
2、ELISA实验洗涤缓冲液
3、ELISA实验稀释液
4、ELISA实验终止液
5、ELISA底物缓冲液
6、ELISA实验TMB四甲基联苯胺、使用液
7、ELISA实验ABTS使用液
8、ELISC

试剂

1、ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):

NaHCO31.59g
NaHCO32.93g
加蒸馏水至1000ml


2、ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS):0.15M

KH2PO4 0.2g
Na2HPO4·12H2O2.9g
NaCl 8g
KCl0.2g
Tween-20 0.05%0.5ml
加蒸馏水至1000ml


3、ELISA实验稀释液:
牛血清白蛋白(BSA) 0.1g
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。

4、ELISA实验终止液(2M H2SO4):
蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸98%、21.7ml。

5、ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):

0.2M Na2HPO4(28.4g/L) 25.7ml
0.1M 柠檬酸(19.2g/L)24.3ml
加蒸馏水50ml


6、ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液:

TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml
底物缓冲液(PH5.5)10ml
0.75%H2O2 32μl


7、ELISA实验ABTS使用液:

ABTS0.5mg
底物缓冲液(PH5.5)1ml
3%H2O22μl


8、ELISA实验封闭液:
牛血清白蛋白(BSA) 5g
加洗涤缓冲液至100ml
值得一提的是有的封闭液中含有脱脂奶粉,不适合长期保存。

为了保证ELISA实验的准确性,实验操作中加入的缓冲液和各组分一定要,将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔,严防交叉污染。