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酵母菌基因组DNA的提取

更新时间:2017-07-18 点击量:650

酵母菌基因组DNA的提取

一:仪器:同方法一 二:试剂:SE缓冲液(1M*,0.1MEDTA pH7.5);*(50mg/ml);20%PVP;蛋白酶K缓冲液(10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA);其余同前三:操作  1.5ml  对数生长期细菌细胞         离心,12000rpm,1-2min       沉淀         溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul*37℃,1hr             离心,12000rpm,8-10min           沉淀溶于100μL,0.5μl蛋白酶K,混匀,37℃,1hr              加入1.2ml的CTAB/NaCL,200μl20%PVP 混匀  65℃,30min等体积酚//异戊醇混合液,混匀,离心,12000rpm,4-5min          上清,上清液 
2V无水乙醇、1/10VnaAC, 
-20,2或-80℃,30min 
                                 10000RPM,10min 
沉 淀  
70%冷乙醇洗涤 
真空干燥 干粉-20℃保存, 
或复溶于0.5-1mlTE或水中,分装成小体积, -20℃或4℃保存 
 
四:鉴定  
所提DNA进行Agarose胶分析(电泳过程见附),紫外观测仪观测,凝胶成像系统拍摄。