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试验的标准曲线和测定的重复性差,这是什么原因造成的?

更新时间:2017-05-02 点击量:1146

试验的标准曲线和测定的重复性差,这是什么原因造成的?

实验中,有很多新手在检测时候遇到试验的标准曲线和测定的重复性差,这是什么原因造成的?本章就以上问题作出具体解答,欢迎参考学习。

其实,这个问题我们经常遇到,试验的标准曲线和测定的重复性差,这是典型的由测定操作引起的问题,常见原因如下:

a)可能原因:加样本及试剂量不准;孔间不一致;

解决方法:校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密。

重复某一样品时,加样时间尽可能与*次接近;

重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性;

样品稀释前应充分混匀。

b)可能原因:加样过快,孔间发生污染;

解决方法:重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性;加样不要过快。         

c)可能原因:加错样本;

解决方法:检查记录和试剂,是否加错样本。

d)可能原因:加样本及试剂时,加在孔壁上部非包被区;

解决方法:加样枪头不要贴壁。

e)可能原因:不同批号试剂盒中组分混用;

解决方法:不同批号试剂盒中组分不可混用。

f)可能原因:温育时间、洗板、显色时间不一致;

解决方法:检查时间是否一致。

g)可能原因:孔内污染杂物;

解决方法:离心样品,排除杂物。

h)可能原因:试剂/样品没有混匀;

解决方法:充分混匀样品和试剂。

i)可能原因:血清标本未*凝固即加入,反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血    

细胞,易出现假阳性反应等。

解决方法:待血清标本*凝固后做试验。

在实验室,对试剂准备一般不太注意,通常的做法是,在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
    因此,在ELISA测定中试剂的准备zui为关键的是,在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20min以上后,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。其次,目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制,因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。
此外,当试剂盒以OPD为底物时,则底物溶液应在反应显色前临时配制。