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染料法荧光定量PCR试剂盒的安全操作注意

更新时间:2021-06-11 点击量:981
   染料法荧光定量PCR试剂盒中聚合酶链式反应是体外酶促合成特异DNA片段的一种经典方法,由变性、退火及适温延伸组成,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点,是分子生物学实验的基本实验技术。
  荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种:探针法荧光定量PCR试剂盒和染料法荧光定量PCR试剂盒。而荧光定量PCR的方法相应的可分为特异类和非特异类两类,特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物;而非特异性检测方法是在在PCR反应体系中,加入过量荧光染料,荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射出荧光信号。前者由于增加了探针的识别步骤,特异性更高,但后者则简便易行。
  染料法荧光定量PCR试剂盒注意事项:
  1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。
  2. 试剂若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在温水水浴中预热十分钟,以溶解沉淀,混匀后再使用。
  3. 电泳检测时,切勿使用含有SDS的。否则,电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。
  4. 建议扩增片段长度1kb以内,以便扩增效率佳。
  5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。