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重组柔嫩艾美耳球虫SO7 蛋白的的原核表达

更新时间:2018-01-23 点击量:1365

重组柔嫩艾美耳球虫SO7 蛋白的的原核表达及其对同源性感染的免疫保护性研究

实验原理

通过原核表达系统大肠杆菌来表达柔嫩艾美耳球虫的一个抗原基因SO7,把纯化出来的蛋白进行免疫,首免和二免后感染,观察免疫效果。

实验试剂

T4DNA连接酶;限制性内切酶;质粒小提试剂盒;DNA胶回收试剂盒

实验设备

PCR仪;伯乐电泳仪;台式高速冷冻离心机

实验材料

鸡:一日龄的SPF 鸡。

球虫:北京艾美耳球虫强毒株。

细菌:胸苷酸酶基因突变以后形成的χ13型的大肠杆菌。

质粒:pMG36e重组质粒是由中国科学院微生物研究所提供的。

实验步骤

1. 构建没有抗药基因的重组表达载体:pMG36t-SO7;
2. 阳性重组大肠杆菌的鉴定和构建的pMG36t-SO7的稳定性鉴定;
3. 用氯化钙处理E. coli χ13 使pMG36t-SO7进入到E. coli χ13体内thyA突变位置处;

4. 用LB培养基培养E. coli χ13,筛选阳性的E. coli χ13,即:E. coli χ2;

5. SO7 蛋白在E.coli χ2里表达的鉴定:用SDS-PAGE和蛋白质印迹法来进行;
6. 用艾美尔球虫卵囊对鸡进行免疫和攻毒。免疫和感染程序见下图:

                     

7. 用E.coli χ2介导的免疫反应;

8. E.coli χ2对同源感染的免疫效果的评估;
9. 数据分析。

注意事项

近年来活的弱毒苗已经开始使用了。然而,在使用这种疫苗时安全问题不容忽视,另外,大规模生产活的弱毒苗价格很昂贵,新一代的疫苗,像使用基因重组技术来表达寄生虫抗原,将会产生更好的预防效果。

对于一个成功的重组疫苗来说,一种有效的抗原呈递系统是至关重要的,抗原的入侵途径和抗原的选择也是影响成功的决定性因素。

在感染过程中,针对球虫会产生特异性的抗体,而且这些抗体对处在细胞外阶段的球虫也能发生中和反应。

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