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内参蛋白抗体

更新时间:2017-04-20 点击量:1354

内参蛋白抗体

内参(Internal Control)是指试验系统的内部参照,一般对于哺乳动物细胞表达系统来说是指由看家基因(house keeping gene)编码表达的蛋白,他们在各种不同组织和细胞中的表达都相对恒定,在实验中检测蛋白表达水平时,常常选来作为参照物。上节我们介绍了三种常用胞浆的内参蛋白(肌动蛋白,β-Actin;β-球管蛋白,β-Tubulin;甘油醛-3-磷酸脱氢酶,GAPDH),这一节我们将会介绍其他几种内参蛋白。

Na/k泵通道蛋白(Na+/K+-ATPase),即Na+/K+-ATP酶,是一种整合膜蛋白。其由1023个氨基酸组成,分子量为113KD。用WB方法检测一种膜蛋白的表达时,多选用Na+/K+-ATPase作为内参。如果还在为WB实验中膜蛋白检测的内参选择烦恼,推荐可以试试Cloud-Clone Corp. 制备的Na+/K+-ATPase内参抗体。

*氧化酶 IV(COX IV)是一种异源寡聚酶,通常含有13个亚基,定位于线粒体内膜,是线粒体呼吸链的酶复合物。由于在线粒体外膜和质膜上都有COX IV,COX IV抗体常用作检测线粒体蛋白的内参抗体,其分子量为16kD左右。

PCNA即增殖细胞核抗原,因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名,以后的研究发现PCNA与细胞DNA合成关系密切,在细胞增殖的启动上起重要作用,是反映细胞增殖状态的良好指标。在细胞核内合成,并存在于细胞核内,其由261个氨基酸组成,分子量为36KD。 制备的PCNA抗体可以作为研究增殖细胞及肿瘤细胞的内参抗体。WB检测多种细胞,PCNA均有表达,见图1。但是PCNA对于非增殖细胞或经过抗增殖处理的细胞并不是一个好的内参。

Lamin B即核纤层蛋白B, 是凋亡关键因素Caspase家族的作用靶子,受Caspase 的剪切而活化,位于核膜。其由586个氨基酸组成,分子量为66KD。由于核纤层蛋白B在物种间的高度保守性,常常被选用做内参。当WB的目的蛋白为核蛋白时,可选用 制备的Lamin B内参抗体。但是对于没有核被膜的样品核纤层蛋白B是不适合的。在凋亡实验时,Lamin B也不适合作为内参。

组蛋白Histone H3.1由于是染色体的组成型表达组分,表达比较稳定,经常被作为zui广泛的核内参使用。组蛋白是和DNA等核酸组合在一起形成核蛋白,换句话,核蛋白组成成分是组蛋白,也非常保守,不会因为受到处理而改变,所以用于作为内参。 组蛋白Histone H3.1由136个氨基酸组成,分子量为15KD。 已成功制备的组蛋白Histone H3.1抗体,可作为研究核蛋白的内参抗体。

在选用内参时,需综合考虑样本种属来源,目的蛋白分子量和目的蛋白表达部位以及实验环境,选择合适的内参,保证实验结果的准确性。