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单克隆抗体双夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究

更新时间:2016-01-27 点击量:605

单克隆抗体双夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究

用纯化的Min-A株伪狂犬病 病毒(PRV)免疫兔子和昆明鼠,制备高免血清并提纯IgG。兔抗PRV高免血清琼扩效价为1:32,纯化兔抗PRV IgG蛋白含量为7.34mg/ml;鼠抗PRV高免血清琼扩效价为1:16,纯化鼠抗PRV IgG蛋白含量为5.74mg/ml。 复苏本实验室研制并保存的分泌抗伪狂犬病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞OH6,按常规方法制备腹水、提纯IgG,并重新对其作了鉴定。该杂交瘤细胞的平均染色 体数目为94条;建立了检测单抗的间接ELISA方法,杂交瘤细胞培养上清和腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1:1000和1:200000;该株 单抗在有无补体参与下均具有中和活性,中和效价分别为1:64和1:16;该株单抗具有良好的特异性,与PRRSV、HCV、PPV不发生交叉反应。 利用所制备的兔抗PRV IgG和McAb建立了检测PRV的“单克隆抗体双夹心ELISA”。兔抗PRV IgG包被浓度为4.59ug/ml(1:1600倍稀释),McAb的工作浓度为6.45ug/ml(1:800稀释)。该检测方法特异、灵 敏、可靠、方便、快捷;与动物试验、病毒分离和中和试验符合率较高;zui低病毒检出量为200ng/ml;整个操作过程仅需4.5h(不包括包被);建立了 科学的判定标准;该方法不需要特殊设备和技术,便于推广。通过对人工兔病料和自然发病猪病料的检测研究,发现扁桃体和脑是PRV检测器官。