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详解探针法荧光定量PCR试剂盒检测方法的局限性

更新时间:2023-02-24 点击量:374
  探针法荧光定量PCR试剂盒使用化学修饰的热启动聚合酶,反应特异性高,大程度地避免了非特异扩增;反应缓冲液经充分优化,反应灵敏快速,多个循环只需二十多分钟;抗干扰的能力强,反应重复性好,适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。
  探针法荧光定量PCR试剂盒安全使用注意:
  使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。
  所有操作严格按照说明书进行;
  反应液应避光保存;
  避免反复冻融,开启后尽量在三个月内使用完毕。
  试剂盒内各种组分使用前应自然融化,混匀并短暂离心;
  反应中尽量避免气泡存在,管盖需I盖紧;
  使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
  样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染。
  探针法荧光定量PCR试剂盒检测方法的局限性:
  样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
  阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
  病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
  样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
  不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
  试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。