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探针法荧光定量PCR试剂盒实验规则,就剩你不知道了!

更新时间:2022-08-23 点击量:417
   实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量和定性分析。
  探针法荧光定量PCR试剂盒作用原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
  探针法荧光定量PCR试剂盒实验规则:
  1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。
  2、要配备多种规格的液体和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。
  3、要在实验前一小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
  4、实验时,要使底物避光保存。
  5、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
  6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
  7、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
  8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动三十秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
  9、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性。
  10、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。